細胞外泌體蛋白質組學

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所有真核細胞類型包括造血細胞、細胞上皮細胞、外泌神經細胞、體蛋幹細胞、白質脂肪細胞和病症細胞均可在培養條件下分泌外泌體。組學體内所有體液,細胞包括血液、外泌唾液、體蛋腦脊液、白質腹水,組學甚至尿液中都可以分離得到外泌體。細胞這些外泌體傳輸多種信号分子,外泌包括蛋白質、體蛋信使核糖核酸(mRNA)和非編碼核糖核酸(RNA),白質其攜帶的組學分子可以被其他細胞吸收。因此,外泌體可以将生物信息轉移到相鄰細胞。這種細胞間通信不隻涉及生理功能,還涉及一些疾病的發病機理,包括瘤、心血管疾病和神經退行性疾病等。細胞外囊泡(EVs)表示了細胞間通訊的一個重要模式。細胞外泌體蛋白質組學

細胞外泌體蛋白質組學,外泌體提取試劑盒

外泌體能攜帶多種生物活性分子循環于血液/體液中并介導長距離的細胞間通訊,中流來源外泌體富含的蛋白質、核苷酸、脂質等分子能夠反映其來源細胞的生理及病理狀态,外泌體特殊的脂質雙分子層結構能保護其内RNA等分子免于降解,因此,檢測中流外泌體成為液體活檢一個明顯優勢。臨床試驗研究表明,外泌體在多種疾病的早期診斷、療效和預後監測等方面都具備較好的應用價值,正逐漸成為臨床診療中新的、理想的生物标志物和可能的靶向藥物載體。随着技術的進步,組學時代的到來,大規模蛋白質組學已經被聯合應用于篩選和揭示多種ai症細胞外囊泡的标志物。海洋生物外泌體示蹤類風濕關節炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。

細胞外泌體蛋白質組學,外泌體提取試劑盒

由于卵巢中流細胞質膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphati[1]dylserine,PS)可以外泌體形式分泌入血,惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對照者,因此外泌體中的PS可用于協助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIIImRNA已被證明可作為膠質母細胞瘤患者診斷的支持證據。2020年,DavidLyden和WilliamR.Jarnagin教授團隊合作,通過探究來自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個人類樣品中細胞外囊泡和顆粒(extracellularvesicleandparticle,EVP)的蛋白質組學特征,鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白(特異度和靈敏度分别為95%和90%),并可區分患者的中流類型,使基于外泌體的中流診斷和鑒别診斷向前邁進了一步。

流式細胞技術針對外泌體的表面抗原标記物進行檢測,能夠實現外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低,所以采用常規的流式細胞儀進行檢測時往往需要将外泌體與beads連接以增大表面積、增強反射,操作耗時又費力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細胞儀(HSFCM),将可檢測的外泌體粒徑降至40nm,能夠在不連接beads的情況下實現每分鐘10000個外泌體的檢測,并且能夠結合免疫熒光的方法進行外泌體标志蛋白質的定量檢測,目前該儀器已商品化。科學家也嘗試利用外泌體的壓制發病機制功能。

細胞外泌體蛋白質組學,外泌體提取試劑盒

外泌體特指直徑在30-150nm的囊泡,其主要來源于細胞内多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合後釋放到胞外基質中。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60,HSP70和HSP90),本示蹤病毒使用CD9作為生物标記,通過将CD9與熒光蛋白偶聯,帶熒光的膜蛋白會在表達至外泌體膜上,便于後續進行、觀察内化或其他實驗。攜帶有外源基因的慢病毒載體在慢病毒包裝質粒、細胞系的輔助下,經過病毒包裝成為有ganran力的病毒顆粒,通過ganran細胞或組織,實現外源基因在細胞或組織中表達。在過去幾年中,有幾個實驗室報道了各種細胞類型的外泌體分泌,并讨論了其潛在的生物學功能。研究所外泌體提取試劑盒服務

幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白,回收量高,操作重複性好。細胞外泌體蛋白質組學

外泌體中存在着某些特定的蛋白質、脂質和多糖,基于抗原–抗體特異性識别和結合作用原理,可将外泌體從其他組分中分離出來。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜聯蛋白、上皮細胞黏附分子或肝素等都可以作為抗原,而捕獲外泌體的抗體可以附着在平闆、磁珠、二氧化矽、樹脂、膜親和過濾器、纖維素濾膜、聚酰氨基胺樹狀聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶聯免疫吸附法和磁珠法等。酶聯免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔闆作為抗體附着介質,其結果用吸光度值表示,該方法可以快速分析已知表面生物标志物的表達,也可以瞬時讀出外泌體的産量和特異性。磁珠法多使用共價包覆鍊黴親和素的磁珠,與樣品一起孵育後可通過磁泳将被結合的外泌體從樣品組分中分離出來。鑒于微米級磁珠可賦予更大的接觸面積,該方法不jin具有高度特異性,還具有比超速離心更高的外泌體産率。細胞外泌體蛋白質組學

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