山東高效率PEI轉染試劑試用裝
準備DNA-PEI複合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的無蛋白培養基稀釋适量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊将稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿颠倒添加順序)。充分混勻後,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI複合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI複合物并輕輕渦旋培養闆/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然後滴DNA-PEI複合物。轉染3h後,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。更多關于Polysciences PEI相關内容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關注我們的公衆号:Mine-bio,回複關鍵詞“PEI申請”,即可參加!有哪些不錯的PEI轉染試劑品牌?山東高效率PEI轉染試劑試用裝
PEIMAX粉末配置方法:1)将1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中;2)放入攪拌轉子,放置于磁力攪拌器上,設置攪拌程序以形成一個較小的漩渦;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超過7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管将pH重新滴定至6.9~7.1;6)将溶液轉移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉染試劑溶液;8)按需分裝,4°C儲存(切記不可冷凍);注:未經配制的粉末有效期為2年。配置成液體後分裝在合适的瓶子中,并且保存在4℃的轉染試劑将可在6個月之内保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉染試劑可延長有效使用期至1年。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公衆号:Mine-bio,回複關鍵詞“PEI申請”,即可參加!非脂質體PEI轉染試劑試用裝可高效轉染多種類型細胞PEI MAX 是一款高度濃縮的粉劑,大量科學家選擇PEI MAX ,在内部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑。
接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,将細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞彙合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI複合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的無蛋白培養基稀釋适量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊将稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿颠倒添加順序)。充分混勻後,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI複合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI複合物并輕輕渦旋培養闆/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然後滴DNA-PEI複合物。轉染1.5h後,添加½體積的包含30%血清的生長培養基。更多關于Polysciences PEI轉染試劑,歡迎咨詢曼博生物!想申請PEI試用裝,請關注我們的公衆号:Mine-bio,回複關鍵詞“PEI申請”,即可參加!
接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,将細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞彙合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI複合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的無蛋白培養基稀釋适量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊将稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿颠倒添加順序)。充分混勻後,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI複合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI複合物并輕輕渦旋培養闆/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然後滴DNA-PEI複合物。轉染1.5h後,添加½體積的包含30%血清的生長培養基。關于轉染試劑相關産品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關注我們的公衆号:Mine-bio,回複關鍵詞“PEI申請”,即可參加!想購買24765-1在哪裡可以買?
對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪闆可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪闆,可适當降低鋪闆密度,以确保轉染時細胞的彙合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可适當降低鋪闆密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI複合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI複合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。更多關于PEI轉染試劑相關産品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關注我們的公衆号:Mine-bio,回複關鍵詞“PEI申請”,即可參加!用PEI轉染試劑時,一般和DNA的比例是多少?非脂質體PEI轉染試劑試用裝
PEI轉染試劑是線性的好還是分支的好?山東高效率PEI轉染試劑試用裝
1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪闆可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪闆,可适當降低鋪闆密度,以确保轉染時細胞的彙合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可适當降低鋪闆密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI複合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI複合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。更多關于PEI轉染試劑相關産品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物。如想申請PEI試用裝,請關注我們的公衆号:Mine-bio,回複關鍵詞“PEI申請”,即可參加!山東高效率PEI轉染試劑試用裝
本文來自開封市泰達電爐科技有限公司:http://iteam365.cn/Article/67b099520.html
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