甯波正揚生物病毒檢測注意事項
根據現有法規和指導原則可以發現，RCL病毒檢測方法主要包含指示細胞培養法、ELISA法、PCR/q-PCR法和PERT法。因為指示細胞培養法檢測需28天，并且因為陽性對照病毒的性質，要求其需要在P3或者P2實驗室環境中進行，緻使該方法具有耗時長，環境要求高的特點。相比而言,基于VSV-G序列的q-PCR方法或基于psi-gag序列的PCR方法，因其具有檢測時間短、環境條件簡單、靈敏度高和可重複性強等優點，被許多CAR-T申報企業作為快速放行方法。歡迎聯系重組腺相關病毒檢測。甯波正揚生物病毒檢測注意事項
基因治 療産品是近年來國内外藥物研發的熱點，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治 療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的将基因整合進靶細胞基因組、穩定的基因表達等特點，被認為是蕞有希望的基因治 療載體。考慮到慢病毒對人的病原性及相關的安全性，所使用的慢病毒載體均為複制缺陷型載體，但在病毒載體生産過程中可能由于同源重組或非同源重組導緻可複制性慢病毒(RCL)的産生，RCL可以整合到細胞基因組中，從而導緻原ai基因激 活，抑ai基因破壞等，因此，這類産品中的複制型慢病毒檢測是安全性檢測中非常重要的項目，美國FDA及中國CDE都要求在生産的整個過程及不同階段都要進行RCL檢測，以确保無RCL的污染。上海重組腺相關病毒檢測常見問題複制型逆轉錄病毒檢測要求有哪些？
美國FDA要求對于采用γ-逆轉錄病毒載體和慢病毒載體的産品，需要在整個生産過程及不同階段進行RCR複制型逆轉錄病毒／RCL複制型慢病毒檢測，針對載體生産用主細胞庫、工作細胞庫、生産終末細胞、載體上清液及在體外培養超過4天的載體轉到細胞進行檢測。針對慢病毒載體使用時RCL的檢測，除了金标準——指示細胞培養法，還需要選擇2種不同原理的快檢方法對其進行補充檢測。RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩定性好等優點，是RCR/RCL補充檢測的優 選方法。
目前針對RCL複制型慢病毒檢測的方法差異很大，例如，實時定量PCR方法(Q-PCR法)會因為細胞或質粒DNA殘留導緻假陽性；合胞體形成測定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件，該方法的靈敏度還未得到驗證；标志物補救測定法尚不清楚來自載體生産過程中的RCL是否會濟活标志物；逆轉錄酶活性測定法(PERT)不能區分RCL和載體顆粒，且細胞中固有的内源性 病毒顆粒也會影響檢測結果的判斷；細胞培養法檢測時間過長。如您有需要，歡迎聯系！為什麼要做複制型逆轉錄病毒檢測？
RCL複制型慢病毒檢測方法包括以下3種：①ELISA法(p24蛋白測定)：适用于由載體生産過程中病毒基因組之間的重組形成RCL的檢測。但，對于VSV-G包膜質粒和來源于其他病毒的gal-pol基因功能組件之間發生重組不表達p24蛋白的假型病毒不适用。其優點為适用性廣（濃縮載體、終末細胞、血清血漿等多種樣本）、靈敏度高和可定量等。②使用qPCR的方法測定VSV-G基因和PCR方法檢測由病毒載體質粒和包裝質粒重組産生的psi-gag基因序列，具有靈敏度高，可重複性和操作簡單等優點。③測定逆轉錄酶活性的方法，它可以用來檢測RCL相關的不同結構的逆轉病毒，缺點為在某些細胞檢測中，存在背景高的現象。慢病毒檢測助力CAR-T細胞醫治産品質控放行。杭州RCR病毒檢測價格
CAR-T細胞醫治産品中複制型慢病毒檢測的監管要求。甯波正揚生物病毒檢測注意事項
qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終産品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種産品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞産品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生産終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL/RCR，以确保生産工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終産品階段可采用qPCR檢測法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終産品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細胞種産品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細胞培養法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細胞産品制備過程中進行多面控制(如對慢病毒載體及生産終末細胞采用基于細胞培養方法測定RCL/RCR，以确保生産工藝過程中不存在RCL的風險)，細胞終産品階段可采用qPCR檢測法快速放行。。甯波正揚生物病毒檢測注意事項
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