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無血清細胞凍存液：凍存注意：開蓋之前，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。以下說明适用于在6孔闆内的培養物的凍存。培養物應該在适合傳代的時候進行收集和凍存。每管所含有的細胞應當來源于6孔闆的1個培養孔。如果使用其他的培養器皿，請相應的調整體積。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。2.輕輕吸走上清液，注意不要擾動細胞團。3.用血清學吸管以1mL的TBD-698重懸細胞。在打散細胞團時，盡量減少細胞聚集體分解。4.用2mL的血清學吸管将1mL的細胞聚集體轉移到标記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法，每分鐘降低1度，随後可以在-196°C液氮長期保存。不推薦在-80°C長期保存。逐步降溫法：-20°C保存2個小時，然後-80°C中保存2個小時，随後可以在-196°C液氮中長期保存。無血清細胞凍存液可用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。成都無血清細胞凍存液服務電話
細胞凍存注意事項：離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍後的細胞懸液直接吹打均勻後分裝到培養瓶中進行培養，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是标準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須将離心後的液體前倒淨，且一定倒幹淨。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行複蘇，結果無有異常。蕪湖無血清細胞凍存液産品介紹含血清，細胞污染(細菌、黴菌和支原體等)的風險更高。
細胞凍存，我們應該注意哪些事項：DMSO快速稀釋會對細胞造成滲透性損傷，使存活率下降50%。對于DMSO凍存的細胞，複蘇後應緩慢稀釋成細胞懸液：1）凍存液：培養基=1:1稀釋成細胞懸液後離心，然後重懸至培養皿中培養，隔天換液；2）凍存液：培養基=1:10稀釋成細胞懸液，不用離心，直接放置到培養瓶中培養2-4小時後，換液。上述兩種方法都是比較常用的細胞複蘇方法，後者更适用于原代細胞或比較難養的細胞。液氮内的細胞凍存較長時間不要超過半年，凍存在液氮中的細胞應一段時間内進行更替。一個細胞系在培養一個月後，可複蘇一管新的細胞确保其質量沒有發生太大變化，傳代幾次後，再凍存留種。
細胞凍存的操作步驟：1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；2.取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。3.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；4.離心1000rpm，5min；5.去除胰蛋白酶，加入适量配制好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的較終密度為5×106/ml～1×107/ml；6.将細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml；7.在凍存管上标明細胞的名稱，凍存時間及操作者；8.凍存：标準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可将裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器内。可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。
細胞冷凍的原理：細胞凍存及複蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞内的水分滲出細胞外，減少細胞内冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。複蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間内即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞内形成胞内再結晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術将細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀态而将其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再複蘇細胞用于實驗。而且适度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丢種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞内水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活。無血清凍存液注意事項：凍存液中含DMSO成分，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。蕪湖無血清細胞凍存液産品介紹
無任何外源蛋白和血清，适用于各類動物細胞株凍存。成都無血清細胞凍存液服務電話
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術将細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀态而将其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再複蘇細胞用于實驗。而且适度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丢種，起到了細胞保種的作用。為什麼要進行細胞凍存？連續培養的細胞系容易發生遺傳漂變，有限細胞系較終會發生衰老，所有培養的細胞都易受到微生物污染，即使運轉情況較好的實驗室也會遇到設備故障的問題。由于已建立的細胞系是一種寶貴資源，更換細胞系成本高昂，而且耗費時間，因此，十分有必要将細胞冷凍起來長期保存。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞成都無血清細胞凍存液服務電話
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