VWF免疫熒光試驗

免疫熒光技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程序也還比較複雜。熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若幹種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，并且大多操作簡便，便于推廣。國外生産的TDM用試劑盒，有相當一部分即屬于此類，并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生産。由于一般熒光測定中的本底較高等問題，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難。新發展了幾種特殊的熒光免疫測定，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣，在臨床檢驗中應用。免疫熒光技術可以用于研究細胞内蛋白質的定位和表達水平。VWF免疫熒光試驗

免疫熒光檢測相對于酶檢測的優勢：定量熒光信号的能力（與使用基于酶的方法進行的定性測定相反）；複用能力（可以結合不同發射光譜的熒光染料來檢測多種蛋白質）；熒光染料的光穩定性。免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理，先将已知的抗原或抗體标記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞内的相應抗原（或抗體）。在組織或細胞内形成的抗原抗體複合物上含有标記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察标本，熒光素受外來激發光的照射而發生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的組織細胞，從而确定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。VWF免疫熒光試驗免疫熒光技術可以通過熒光信号顯示和檢查細胞或組織内的抗原或半抗原物質。

免疫熒光通過抗體與示蹤物質結合，利用抗原-抗體結合反應，進而對抗原所在的細胞或組織進行定性或定量。由于熒光素所發的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光，可以看見熒光所在的細胞或組織，利用定量技術測定含量，從而可對抗原進行細胞定性和定位分析。細胞免疫熒光用途：快速直觀顯示所檢測蛋白的細胞定位。材料與儀器：樣品：貼壁細胞；試劑：4% 組織固定液，PBS，Triton X-100，BSA，熒光二抗，免疫熒光染色二抗稀釋液，抗熒光猝滅封片液，0.25% 胰酶；器材：6/12/24 孔闆，細胞爬片（蓋玻片），載玻片，15 ml 離心管。

免疫熒光法是将免疫學方法(抗原抗體特異結合)與熒光标記技術結合起來研究特異蛋白抗原在細胞内分布的方法。由于熒光素所發的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對抗原進行細胞定位。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織内抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學技術。免疫熒光細胞化學是根據抗原抗體反應的原理，先将已知的抗原或抗體标記上熒光素制成熒光标記物，再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織内的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體複合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察标本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色)，可以看見熒光所在的細胞或組織，從而确定抗原或抗體的性質、定位。免疫熒光技術是将抗體與熒光素等示蹤物質結合，通過抗原抗體反應進行定位。

細胞和組織樣品處理：準備熒光标記的細胞樣品：為實現較佳的圖像質量，首先應建立針對目的蛋白和細胞結構的研究，同時将其他一切背景等排除在圖像之外。固定和破膜細胞樣品用于标記–首先将細胞結構、蛋白和核酸固定，然後使熒光染料和抗體滲入到細胞内部，标記目的靶點。封閉細胞樣品，防止熒光标記物與研究無關的蛋白非特異性結合，較大限度提高信噪比。蛋白封閉液有助于減少非特異染色。抗體能夠取代封閉蛋白與其表位形成高親和力結合，而封閉液可防止樣品中的低親和力結合。免疫熒光技術可以同時檢測多個目标分子，通過不同顔色的熒光染料進行标記。VWF免疫熒光試驗

免疫熒光技術可以用于研究遺傳疾病和基因表達調控。VWF免疫熒光試驗

免疫熒光應用範圍：其應用範圍極其普遍，可以測定内分泌、蛋白質、多肽、核酸、神經遞質、受體、細胞因子、細胞表面抗原、肉瘤标志物、血藥濃度等各種生物活性物質。根據診斷類别，又可分為傳染性疾病、内分泌、藥物檢測、免疫學、血型鑒定等。許多物質都可産生熒光現象，但并非都可用作熒光色素。隻有那些能産生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4，較大吸收光波長為490495nm，較大發射光波長520530nm，呈現明亮的黃綠色熒光。VWF免疫熒光試驗

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